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調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）是CD4＋T細(xì)胞的一個(gè)組成部分，可抑制其它T細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在健康人外周血中，Tregs約占CD4＋T細(xì)胞的3-5％。Treg具有以下部分或全部特征：CD25高表達(dá)、FoxP3陽性(胞內(nèi))、CD127低表達(dá) 。

為了減少胞內(nèi)染色所需的固定、破膜等時(shí)間，設(shè)計(jì)了以CD25和CD127為主的方案，以CD25hi CD127－定義的Treg中，僅13％細(xì)胞不表達(dá)FoxP3，故一般情況下可代替FoxP3檢測 。

在本方案中，除了上述所有的抗體，又通過CD39，CD73，CD45RA，CD45RO和PD-1的表達(dá)在功能和表型上進(jìn)一步表征Treg。

CD39：與Tregs的高免疫抑制活性相關(guān)；

CD73：有助于Treg和其他抑制性免疫細(xì)胞以及腫瘤微環(huán)境的抑制功能；

CD45RA和CD45RO：分別定義初始和活化的Treg；

PD-1：負(fù)調(diào)節(jié)Treg功能；

最后，包括CD38和HLA-DR，這兩種T細(xì)胞活化標(biāo)記的差異表達(dá)識別出與疾病控制完全相關(guān)的亞組。

冷凍或新鮮的PBMC。

如果該方案在CytoFLEX流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測研究，推薦的機(jī)型為CytoFLEX LX(UV-B-R-V-Y)，相應(yīng)的產(chǎn)品信息可關(guān)注文末“廣州格盧瑞”公眾號進(jìn)行了解。

A圖設(shè)門策略：排除粘連體（FSC-A/ FSC-H）→選Aqua-CD3+排除死細(xì)胞（Aqua/CD3圖）→排除任何用染料聚集體非特異性標(biāo)記的細(xì)胞（灰色框）和淋巴細(xì)胞→CD4 +T細(xì)胞和CD8 + T細(xì)胞用于進(jìn)一步分析。

B圖： CD4+和CD8+T細(xì)胞活化的評估： 分別對A圖中CD4+T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞亞群內(nèi)研究CD25，CD38，CD39，CD45RA，CD45RO，CD73，CD127，HLA-DR和PD-1的表達(dá)水平。 

Treg的鑒定：在CD4+ T細(xì)胞內(nèi)，Treg是CD127- CD25hi的一群細(xì)胞。

C圖：Treg表型： 對Treg（CD127- CD25hi）進(jìn)一步分析，以 CD39/CD73，CD45RA/CD45RO以及CD38/HLA-DR和CD45RA/PD-1進(jìn)行建圖，Gate到Treg（CD127- CD25hi），以研究Treg的成熟狀態(tài)，調(diào)節(jié)潛力和細(xì)胞活化狀態(tài)。

D圖：Treg活化的研究。說明了總Treg表達(dá)的活化標(biāo)記組合的比例

Mahnke YD, Beddall MH, Roederer M. OMIP‐015: Human regulatory and activated T‐cells without intracellular staining. Cytometry A. 2013 Feb;83(2):179-81. doi: 10.1002/cyto.a.22230.  PMID: 23166007

*本文由貝克曼庫爾特公司流式技術(shù)支持高敏供稿。文中所提及產(chǎn)品（CytoFLEX）僅用于科研，不用于臨床診斷。